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今天,小编就先讲讲实验的第一步,有关“包被”的那些事!
包被
将抗原抗体溶解,并将其吸附在聚苯乙烯等固相载体上,这个过程就是固相化,也就是包被。包被是ELISA实验的第一步,操作简单,但耗时较长,有需要时应确定最佳包被浓度。
包被缓冲液配方
在此列举两种常用的包被缓冲液配方:
0.05mol/L碳酸盐缓冲液(pH9.6)
0.02mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.4)

包被原理
ELISA所用的包被抗体抗原一般是蛋白质,受蛋白质的分子量、等电点、浓度等的影响,载体对不同蛋白质的吸附能力是不相同的。应使用pH大于蛋白的PI的包被缓冲液包被,一是因为蛋白质与酶标板的结合主要是靠疏水作用的物理吸附。而缓冲液的PH略大于包被蛋白的PI,有利于蛋白质疏水键的适当暴露。二是因为酶标板聚苯乙烯表面暴露的主要是C-H键,而缓冲液的PH略大于包被蛋白的PI,可以使蛋白质带上负电荷,有利于蛋白质与酶标板的牢固结合,提高包被效率。
包被过程
采用包被缓冲液溶解抗体或抗原,加入适量于聚苯乙烯板或其它固相载体中,4℃过夜包被或者37℃包被2h,包被的最适浓度随固相载体和包被物的性质变化,一般蛋白质的包被浓度为1-5ug/ml,有需要时应确定最佳包被浓度。
4℃包被过夜冰箱

37℃包被2h温育箱
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